
荧光密螺旋春一守体抗体吸收实验用N液ichols株梅毒螺来自旋体抗原悬液在玻片上涂成菌膜,吸附待检血清中的lgG抗体,再用荧光素标记的羊抗人lgG抗体,显示待检血清中含360百科有的抗螺旋体抗体。因待检血清预先经吸附剂去除了非特异性抗体,故特异性较高。一般用于筛选实验阳性标本的确诊实素左得时吧液续业吗验。
操作步骤
(1)抗原片制备:Nichols株梅毒螺旋体(每高倍视野20条)抗原悬液,在玻片上涂数个直径为5mm的菌膜,干后以甲醇固定。
(2)待检血清预处显虽切理:待检血清先经56%30分钟灭活,取50ul血清与200ul吸附剂(Reiter株非致病密螺旋体)混匀,37℃作用30分钟,以充石门照刚罪握企防知市脚分吸除非特异性抗体。
(3)夹心法荧光显色:吸附后的待检血清用磷酸盐缓冲液(PBS)作1;20-1:3来自20的倍比稀释,将稀释后的血清分别滴加于抗原360百科菌膜上,置湿盒内37℃孵育30分钟,然后用PBS洗片,并将玻片在PBS中浸洗,换歌民委液3次,每次5分钟,吹干。各抗原反应片告政水执械上滴加工作浓度荧光素标记的羊抗人lgG抗体,置湿盒37℃般石办想圆次孵育30分钟,再用PBS按前法宜师示识行检样洗片,干后用甘油缓冲液封片。
(4)荧光显微镜观察:每次实验设阳性、阴性、非特异性血清对照。阴性标准血清无荧光菌体或偶尔见荧光菌体出现:阳性对照可见多数(高倍视野15条)荧光菌体出现。并以此为参照作出待检标本的判定。
结果判定
阳性结果参照阳性标准血清的荧光强度判定:半数高倍视野(10条左右)出现荧光,则为(+ +),多半视野呈荧光读室流静迫官除己选(15条左右 )则为(+ + +),全部(约20条)出现强荧光则为(+ + + +)。"可疑"结果参照非特异性血清的荧光强度判定为(+ +)或(+),阴性结果参照阴性对照血清判定为(-)或(+呢)。
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