过碘酸希夫反应

百科

过碘酸希夫反应,简称为 PAS反应(periodic acid Schiff reaction〕。其化学反应的基本过程多糖分子一来自般含有羟基,通过过碘酸的氧化作用,使多糖暴露出醛基,醛基与无色碱性品红结合反应,于多糖存在的部位形成新的紫红色复合物,通过显微镜观察而对组织细胞内的糖原、糖蛋白或粘多糖等化学成分进行定位、定性和定量的研究。

  • 中文名称 过碘酸希夫反应
  • 外文名称 periodic acid Schiff reaction
  • 作用 检测组织中的糖类

概况

  PAS染色法(PeriodicAcid-Schiff 稳资带汽速态反领希小志stain)在组织学上,主要用来检测组织中的糖类。过碘酸把糖类相邻两个碳上的羟基氧化成醛基,再用Schiff试剂和醛基反应使呈现紫红色。

原理

  PAS色又称糖原染色。一般用来显示糖元和其它多糖物质。

  原理:过碘酸能使细胞内的多糖乙二醇基氧化成乙二醛,再与Schi往略心煤取突创ff氏液的无色品以父金济红结合,红色,定位于胞浆上。

来自

  随着医学实验技术的发展,糖原染色应用的范围更加广泛,如用以证明与鉴别细胞内空泡状的性质 ,心肌病360百科变及其他心血管疾病的诊断 ,糖原累积病诊断和研究 ,糖尿病的诊断和研究 ,用于某些肿瘤的诊断等。除用于糖原的鉴定和黏液的显示外 ,还可以观察肾小球基底膜 、结肠杯状细胞 中性黏液物质 、阿米巴滋养体和霉菌的着色。临床诊断、分类和治疗提供 了重要的依据。

方法

固定液

  Carnoy固定液: 纯酒60 ml 冰醋酸10ml赵换派质群千画深力氯仿30ml,也可以选用75%酒精.

液配制

  1) 过碘酸酒清夜配法:

  过碘酸圆紧过香显(HIO .2H O) 0.4g 9心件师盐没久顺唱5%酒精35ml M/5醋酸钠(2.72g+蒸馏100ml) 5ml蒸馏水10ml

  保存于冰箱内,用棕色瓶,可用两周.

  2)Schiff氏液:

  0.5克碱性品红加入100毫升蒸馏水中,时时摇动三角瓶生片出故日束5分钟,使之充分溶解.冷却至50℃后过滤加入10毫升1N盐酸.冷却至25℃,加入0.5-1克偏重硫酸钠,在室温中至少静置24小时,然后密封冰箱保存.

  3) Schiff氏酒精液配置 Schiff氏液 11.5ml 1N HCI 0.5ml 纯酒精 23ml

  4) 亚硫酸水 1%偏重亚硫酸钠10ml 1N HCI 10ml 蒸馏去红很误水 180ml的树胶溶解

  5)哈瑞或迈耶苏木精 略

染色步骤

  1. 石蜡切片脱蜡至水(细胞涂片,冰冻切片直接水洗)

  2. 蒸馏水洗

  3. 过碘酸酒清夜10min

  4. 自来水冲洗10min

  5.创鸡Schiff氏液10min

  6. 流水冲洗5min

  7.用哈瑞苏木精或迈耶苏木精染核3min(细种失胞核染色过深可用盐酸酒精分化)

  8. 流水冲洗5min

  9. 常规脱水、透明话句者、封固

结果

  PAS阳性为红色,细胞核蓝色

实验效果

准备

  1、10g/L过碘酸液

  2、Schif杂息始时管友脸善整汽f染液:

  碱性品红0.5g

  DH2O 100ml

  煮沸后,待片刻,加入碱性品红,振荡数分钟使品红溶解论酸皮著低入,冷至50℃加入1M的盐酸20ml,混匀。待冷

  却至25℃加入偏重亚硫酸钠0.5g,混合,置于带塞的棕色瓶中,放于暗处24小时,染液为无色,如为微红则

  加活性炭1-2g,混合马理过滤,如过滤液仍有红色,应再加少许活性炭,时红色完全被吸收为止。制成后置于棕色

  瓶内保存在冰箱备用,如变为红色,则不能使静怀配土测提用。

  4、苏木素液:

引房直课同打  苏木素0.9g

  95%乙醇 10ml

  铵(钾)财声混叫收银李器们明矾 20g

  DH2O 200ml

  将苏木素溶于95%的乙醇,钾明矾溶于水(可加热),然后将苏木素液加入明矾液中混合,用强火煮

  沸后加氧化汞0.5g,迅速搅拌,成深紫色,迅速移入冷水中,次日过滤,临用时取此液95ml加冰醋酸

  5ml,可使细胞着色清楚。

方法

  1、将新鲜血片或骨髓片用95%乙醇固定10分钟。

  2、10g/L过碘酸液作用20分钟

  3、DH2O洗涤几次,晾干

  4、Schiff染液,60分钟

  5、用自来水洗涤15分钟(细水长流冲洗)

  6、苏木素染液10分钟。

  7、自来水冲洗15分钟,待干。

结果

  阳性反应,胞浆呈红色,阴性反应,胞浆呈无色;

  在正常血片中RBC不染色;

  PLT染成深红色;

  中性粒细胞胞浆染成红色或深红色,有些细胞有阳性颗粒;

  单核细胞的胞浆染成淡红色,可含有细小或粗大阳性颗粒;

  少数淋巴细胞的胞浆内含有少许小的淡红色或红色颗粒;

  正常骨髓的幼稚细胞和有核RBC都不染色;

  巨核细胞的胞浆内呈弥散红色或深红色。

  巨核细胞的胞浆内呈弥散红色或深红色。

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