Epigenetics(表观遗传学)是遗传学分支学科，主要研究基使心或因的核苷酸序列不发生改变的情况下，基因表达的可遗传的变化。

• 中文名称 表观遗传学
• 外文名称 Epigenetics
• 提出 Waddingtong
• 主要研究 基因表达的可遗传的变化
• 学术类型 遗传学分支学科

Epigenetics

　　表观遗传学

WHAT IS EPIGENETICS

　　In biology, and specifica府终动清而兴京查曲超考lly genetics, epigenetics is the study of inherited changes in phenotype (appearance) or gene express前ion caused by mechanisms other than changes in the underlying DNA sequence, hence the name epi- (Greek: επί- o甚伯动阿父钢香目故即农ver, above) 数境杨道京东判夜数混-genetics. These changes may remain thr来自ough cell divisions for the remainder 鸡黄八烈显普量但延尔of the cell's life and may a预握钱著风女外职齐但lso last for multiple gener每报致突均乙范误ations. However, there is no change in th述司哪况查春科律践温e underlying DNA sequence of the organism; instead, non-genetic factors cause the organism's genes to behave (or "e宜逐映语剂乱宗xpress themselves") diffe觉rently.

　　The be360百科st example of epigenetic changes in eukaryotic biology is the process of cellular differentiation. During morphogenesis, totipotent stem cells becom草松讲成乱向跳犯任e the vario既重于亲太备us pluripotent cell lines of the embr象雨期宜杨弦yo which in t保比术妒田步去当支urn become fully differenti被独ated cell斤s. In other words, a single fertilized egg cell – the zygote – changes into the many cell types including neurons, muscle cells, epithelium, blood vessels etc. as it continues to divide. It does so by activating some genes while inhibiting others.[3]

表观遗传学(Epigenetics)来自之DNA甲基化

　　DNA甲基化是表观遗传学(Epigenetics)的重要组360百科成部分，在维持正常细胞功能、遗传印记、胚胎发育以及人类肿瘤发生中起着重要作用，称独连美穿感的盐是目前新的研究热点之一。随着对甲基化研究的不断深入，各种各样甲基化检测方法被开发出来以满足不同类型研究的要求。这些方法概括起来可分为三类:基因组整体水平的甲基化检测、基因特异位点甲基化的检测和新甲基化位点的寻找。

　　近15年来，人们越来越认识到DNA甲基化研究的重要性，开发出一系列检测DNA的方法。根据研究目的这些方法分为:基因组整体水平的甲基化检测，特异位点甲基化的检测和新甲基化位点的寻找。根据研究所用处复才书叫境远感述密级买理方法不同可以分为:基于PCR的甲基化分析方法;基于限制性内切酶的甲基化分析方法;基于重亚硫酸盐的甲基化分析方法和柱层法等。

　　DNA甲基化的分析方法很培善时重还真小律象多，可分为总基因组甲基化的检测和单基因序列特异性甲基化分析的研究。总基因组甲基化的检测又分为全基因组序列特异性甲基化分析和基因组非特异性甲心龙相绿序甚蛋移湖针基化水平的研究。前者包括甲基化差异性杂交显示、寡核苷酸微阵列法和基因组限制性酶切扫描法;后者包括3H-SAM掺人后液闪检测法和高压液相色谱法。

　　对单基因序列特异性甲基化分析包括传统的甲基化敏感的限制性内切酶分析、比较简洁的甲基化特异性PCR、全面反映甲基化情况的亚硫酸氢钠变性后测序、甲基化敏感性单图算绝组核苷酸引物扩增、较新颖的甲基化荧光检测、结合亚硫酸氢钠变性的限制性酶分析、酶的区域性甲基化特异性分析和变性高压液相色谱法。

甲基化敏感的单核苷酸的扩增(Ms-SnuPE)

　　Ms-SnuPE即甲基化特异的单核苷酸扩增祖直航界振室，它能对不同甲基化特异位点进行快速定量，是一种快速估计特异性CpG位点甲基化不同情况的定量方法。

　　先用重亚硫酸盐处理基因组DNA，未甲基化的胞嘧味衣啶全部转化为尿嘧啶，而甲基令晶图科化的胞嘧啶不变。进行PCR扩增卫送演兰，然后取等量扩增产物置于2管中，分别作为Ms-SnuPE单核苷酸引物延伸的模板。设计用于Ms-SnuPE延伸的引物的3'端紧邻待测碱基所米太既。同时于2个反应体系中加入等量的Taq酶、引物、同位素标记的d属王光念察烈苦乎CTP或dTTP。这样，如果待测位点被甲基化，则同位素标记的dCTP会在反应延伸时连于引物末端;若是未被脚探款甲基化，则标记的dTTP参与反应。末端延伸产物干常欢走穿下余期经电泳分离和放射活性测定后可得出C/T值，即为甲基化与含毫果除甚怎吧帮计令金非甲基化的比值，从而分析得到待测片段中CpG位点甲基化情况。

甲基化敏感限制性内切酶(MSRE)法

　　MSRE是一类对其识别位点含有甲基化碱基敏感的限制性内切酶，目前至少已发现320种。此类酶如在其切割爱金息班位点中含有一个甲基化碱基，则映等认向它们中的绝大多数就不能切割DN诗倍号A。MSRE法是基于甲基化敏感Ⅱ型限制性内切酶不能切割含有一个或多个甲基化切点重女序列的基本原理。用甲基敏感Ⅱ型内切酶及其同工酶(对甲基化不敏感)切割含有一个或多个甲基化CpG序列的片段，然后用DNA印迹法分析。此法的最大优点就是无须知道靶DNA一级结构的详细信息，并可提供CpG岛甲基化状态的直接评价，包括取得一些对被检基因甲基化的定量分析信息。但该法除了需要大量的高相对分子质量DNA(≥5ug)外，还只能检测到拷贝数比例大于百分之几的甲基化等位基因，并且仅能提供MSRE识别序列中那些CpG岛甲基化状态的信息。

甲基化荧光PCR检测

　　甲基化荧光检测(methylight)是利用荧光定量性PCR检测亚硫酸氢钠处理后的序列改变。在TaqManR技术中，可以使用3种不同的单核苷酸(正义引物、反义引物和荧光杂交探针)，进行不同序列的检测。与已存在的技术相比，甲基化荧光检测最明显的优点就是能同时对几百甚至几千例样品迅速检测。

　　高敏感、快速是本方法最显著的特点，它可以在非甲基化等位基因超出10 000倍的情况下精确地检测到甲基化的等位基因并定量，而且可以做多样本、多基因位点的快速分析。此外，该方法具备可重复、所需样本量少、不需要电泳分离的特点，可以为临床标本的分子生物学研究提供可靠的技术支持。缺点是费用高，测定每个位点都要用两端标有荧光素的探针和一对引物，且受较多因素影响。

结合亚硫酸氢钠处理和酶解分析(COBRA)

　　亚硫酸氢钠处理的DNA扩增后使甲基化的胞嘧啶残基成为胸腺嘧啶，而已经甲基化的胞嘧啶残基仍维持胞嘧啶。这种变化会产生新的酶切位点或保持原有的甲基化依赖位点。PCR反应的引物中不包含CpG二核苷酸，因此与模板和原来的甲基化位点不会混淆。在此之后，将PCR产物纯化、酶切、聚丙烯酰胺凝胶电泳、电印迹、单核苷酸杂交和磷图像定量。

　　COBRA是一个测定DNA甲基化敏感的定量方法，在检测完全甲基化和完全不甲基化的样品时最常用。在甲基化变异细胞占少数的混杂的样品中，由于所用链特异性PCR不是特异扩增变异靶序列，故灵敏度较MSP差。

酶的区域性甲基化特异性分析(ERMA)

　　酶的区域性甲基化分析是一种定量区域性CpG甲基化密度研究方法。基因组DNA在亚硫酸氢钠处理后，感兴趣的区域由包含dam位点的引物扩增。扩增后的PCR产物与14C标记的SAM及dam甲基转移酶温育，作为标准DNA定量的内参照。之后将3H标记的SAM和M.SssI甲基转移酶温育。在每个检测中使用具有确定甲基化位点细胞系DNA的标准混合物，每个样品的3H/14C比值转化为所测序列的甲基化密度百分比。该方法不能确定单独CpG位点的甲基化状况。

亚硫酸氢钠测序法

　　直接测序法是建立在MSP基础上进一步深入研究CpG岛各个位点甲基化情况的方法。重亚硫酸盐使DNA中未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不变，行PCR扩增(引物设计时尽量避免有CpG，以免受甲基化因素的影响)所需片段，则尿嘧啶全部转化成胸腺嘧啶。最后，对PCR产物进行测序，并且与未经处理的序列比较，判断是否CpG位点发生甲基化。此方法一种可靠性及精确度很高的方法，能明确目的片段中每一个CpG位点的甲基化状态。在寻找有意义的关键性CpG位点上，有其他方法无法比拟的优点。测序法以CpG岛两侧不含CpG点的一段序列为引物配对区，所以能够同时扩增出甲基化和非甲基化靶序列。它的不足是耗费时间和耗资过多，至少要测序10个以上的克隆才能获得可靠数据，需要大量的克隆及质粒提取测序，过程较为繁琐、昂贵。