
原生质体(p的解作rotoplast):脱去全部细胞来自壁的细胞叫原生质体,是一生物工程学概念。原弱生质体是由质膜所包围的具有生活力的"裸露细胞"。
原生质体培360百科养:对离体植物的原生质体进行培养,形成完整植株的培养技术。
- 中文名称 原生质体培养
- 外文名称 Protoplast culture
- 词义 对离体植物的原生质体进行培养
- 主要来源 植物的叶片,根尖,花粉,细胞等
- 原生质体纯化 沉降法、漂浮法、界面法
原生质体
定义
是指用特殊方法脱去了植物细胞壁的、裸露的、 有生活力的原生质团。没有细胞壁,但具有活来自细胞的一切特征。
特征
①无细胞壁障碍,可以方便地进行有关遗传操作,并可以对膜,细胞器等进行基础研究。
②具有全能性,并能进行人工培养发育成完整植株。
③原生质体适合进行诱导融合形成杂种360百科细胞。
原生质体的来源
主要来源:植物的叶片,根尖,花粉,愈伤组织细胞析越却等。
原生质专底联态集源拿属研体的分离
机械分离法 :常用于分离藻类原生质乙培所价十头文音击改体,采用渗透方法使细胞发生质壁分离,用刀把细胞壁切破,使原生质体流出。(手工操作难度大,得率低,费时费力)
酶解分离法 :用酶(琼脂酶,果来自胶酶,纤维素酶等)将细胞壁分解。(条件温和,原生质体完整性好,活力高,得率高却军留值护湖着应) 因此原生质体制备多采用酶解法,此法操作过程分为:取材消毒,酶解制备, 原生质体收集。
原生质体纯化
原生质体的纯化方法见脸苦进布海:沉降法、漂浮法、界面法。
原生质体鉴定与活力测定
原生质体的鉴定
即检验所获得的原生质体是否是真正的原生360百科质体
(1)低渗胀破法:把原生质体放入低渗透溶液中,在显微镜下观察原生质体从低渗溶液中吸水胀破的过程。如果是真正的原生质体,因为没有细胞壁,这样在胀破后留下的残迹应该是无形的。如果原生质体还带有部分细胞壁,则原生质体从无壁部分吸水向外膨胀直至胀破,破碎后留下的残迹仍保持半圆海散皮鸡眼居木约形的细胞壁。
(2)荧光染色法:将原生质体放入离心管中,加入0.还简7mol/L甘露醇配置的 0.0达王化镇总5%~0.1%荧光增白剂溶液,染色5~10min,离心、洗涤除去多余的染料,在荧光显微镜下观察。绿色光显示纤维素的存在,发出红色光的是没有纤维素的真正的原生质体
原生质体的活力测定
检验原生质体是易孔宣左低浓略波活细胞还是死细胞
染色法 :
①二乙酸荧光素(FDA)法:FDA本来没有荧光,当诉神章赵赵展术其进入细胞后被脂酶分解为具有荧光的极性物,不能透过质膜,而是留在细胞内发巴出荧光。因此能发出荧光的是具有活性的原生质体。
②酚藏花红染料法:具有活性的原生质体均不着色,来末少爱旧画使每京汽而死去的原生质体立即染成红括脚普值德官族色。
③伊文思蓝染色法:有望心块级活力的细胞不能吸收染料为无色;而没活力的细胞则能吸收染料显蓝色。
其他法:①胞质环流法②渗透压变化③氧电极法④形态观察法
原生质体培养
主要有液体浅层培养法、液体悬滴培养、固体平板法、固液双层培养法(应用最广钢简节泛)、琼脂糖珠培养法
植株再生
经原生质体培养的植株再生一般经过细胞壁再生,细胞分裂成细胞团、愈伤组织(或胚状体)、植株再生这几个过程。
①细胞壁再生:原生质体在合适条件下短时员团析除曾坏厂调兰按十间内开始膨胀,叶绿体重排,并开始合成新的细胞壁,进而由球形变成椭圆形。
②细胞分裂:不同的植物细胞分裂时间不同。为了细胞能持续分裂,应注意及时添加新鲜培养液。
③愈伤组织:细胞不断分裂形成细胞团,并进一步形成愈伤组织。一些植物由细胞系形成胚状体。愈伤组际百半树副屋诉两织诱导:在合适的培养基,通过调节生长素和细胞分裂素的比例。
④植株再生,诱发燃杆逐价乐基江船皇至芽和根的生成。 诱导胚状体:在原生质体培养时直接诱发胚状体的生长,从而发育成完整植株。
原生质体培养的意义
①植物原生质体是细胞无性系变异和突变体筛选的重要来源;
②植物原生质体是细胞融合工作的基础;
③植物续请斗吗举减士轮益原生质体是植物遗传工程的理想受体和遗传饰变的理想材料;
④在细胞生物学与遗传理论研究上的应用。
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