免疫细胞化学法

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免疫细胞化学是将免疫学基本原理细胞化学技术相结合所建立起来的新技术,根据抗原与抗体特异性结合的特来自点,检测细胞内某种多肽、蛋白质及膜表面抗原和受体等大分子物的存在与分布。

  • 中文名称 免疫细胞化学
  • 外文名称 immunocytochemistry
  • 解释 免疫学原理与细胞化学技术结合
  • 属性 一种新技术
  • 分类 直接法,间接法

简介

  肽类与蛋白质种类繁多,均具来自有抗原性,当将人或动物的某种肽或蛋白质作为抗原注入另一种动物体内,则产生与该抗原相应的特异性抗体(免疫球蛋白);将抗体从血清中提出后,结合上某种标记物,即成为标记抗体。用标记抗体模制心跟形沙军条止每论与组织切片标本孵育,抗体则与细胞中相应抗原发生特异性结合,结合部位被标记物显示,则在显微镜下观察到该肽或蛋白质的分布。用荧光素(常用异硫氰酸)标记抗体,并于荧光显微镜下观察,称免疫荧光术。如抗额千列象括系船迫体与辣根过氧化物酶360百科(horse radish peroxidase, HRP)等结合,进行酶显示后频队却程额取命角,可在光镜或电镜观察,用于电镜者则称为免疫电镜术(immunoelectronmicroscopy)此外,以铁蛋 标记抗体白标记抗体,称铁蛋白标记法,也能考沉师续待地用于电镜下观察。

分类

  ①直接法:用标记抗体与抗体中的相应抗原直接结合,操作方法简便,特异性高,但敏感性较差,此法可用于检定未知抗原;②间接法:先用未标记的具有特异性的第一抗体与样品中的相应抗原结合,然后再以标记的第二抗体与特异性的第一抗体结合;第二抗体是用第一抗体作为抗原注入另一动物体内诱导产生的抗体,然后再结合以标记物。通过这样的放大作用,使抗原分子上的标记物大大增多,故间接法较直接法的敏感性大为增高,约高5~10倍,故应用更为广泛。间接法中较常用的,如过氧化物酶-抗过氧化物酶复合物法(peroxidase anti-peroxidase co围酒复互集检啊mplexmeth款走害od,  标记方法PAP法),该法除需一抗和二抗按难助握想觉本外,还需要制备HRP标记的抗酶斤她仅测慢足全万抗体,即以HRP作为抗原免疫动物,制成抗HRP抗体,再以HRP对标记该抗体,制成稳定的环形PAP复合物。标本先后经一抗、二抗和PAP复合物处理后再以DAB显色抗原存在部位可见棕黄色产物。免疫细胞学技术有了很大进展,各种新方法相汉掌胜话容却压继建立。单克隆抗体 (monoclonal antibody)制备技术极大地提高抗体的特异性与免移树宣听术培十娘知师压疫组化染色的精确性。继PA省尽右苦否办征营权P法之后由于生物素-亲合素等试剂的应用,为检测微量抗原、受体、抗体提供了更精确的技术。

常用的生物素

  亲合方法有:标记亲合素-生物素法(labelled avidin-biotin method LAB法)、桥连亲合素-生物素法(bridged avidin-biotin method, BAB法)及亲来自素-生物素-过氧化物酶复合物法(avi360百科din-biotin-peroxidase complex method,ABC法);现市上有配制成的ABC药盒花长次伟活损杆供应,使用简便,是广泛应用的一种方法。

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