《蛋白质纯化实验方案与应用》是2010年6月1日化学工业出版社出版的图书，作者是吕宪禹。

• 书名 蛋白质纯化实验方案与应用
• 作者 吕宪禹
• 出版社 化学工业出版社
• 出版时间 2010年6月1日
• 页数 211 页

内容简介

　　本书详细介绍了各类蛋白质纯化实验技术，包括材料的预处理、蛋白质的粗提、机管有执或里构通单洲经典色谱方法、高效液相色谱、质谱、电色谱、分子印迹、电泳以及蛋白质检测的实验方案及应用实例。

　　强调可操作性，对每一项实验技术，都系统介绍其原理方法和实验过程，特别注重讲解问题分析及解来自决方案，让读者了解到每一点成就都是建立在大量方案设计、具体步骤以及实验结果的正确处理的基础之上。

　　不仅含有经典的实验技术，还特别突出了当前实验的新理论、新技术与新发展，给予蛋白质纯化专业人员以借鉴和引导作用。

　　本书对于遗传学、细胞生物学、分子生物学，以及医学和生物工程领域研究人员开展蛋白质相关研究，具有很强的参考价值。

目360百科录

　　第1章 绪论

　　1.1 蛋白质的研究历史

　　1.2 蛋白质的理化性质和生物学特性

　　1.3 蛋白质纯化手段的历史回顾

　　1.4 纯化蛋白的应用

　　参考文献

　　第1部分 材料的预处理和蛋白质的粗提

　　第2章 不同来源材料的预处理

　　2.1 不同材抓宜连艺及号杨程顶往差料的预处理

　　2.1.1 植物材料的预处理

　　2.1.2 动物材料的预处理

　　2.1.3 微生物材料的预处理

　　2.2 细胞的破碎

　　2.2.1 机械法

　　2.2.2 非机械法

　　方案2.1 超声波法提取烟草叶中的3-磷酸甘油种已外磁财城装目业脱氢酶

　　方案2.孩低都大夜交引略2 从猪胰脏中提取胰凝乳蛋白酶

　　方案2.3 从大肠杆菌中提取诱导表达的(His)6-X

　　参亚输考文献

　　第3章 蛋白质的沉淀

　　3.1 盐析法

　　3.树供别甲理物已决叫酸2 有机溶剂沉淀法

　　3.3 等电点沉淀法

　　3.4 非离子多聚物沉淀法

　　3.5 选择性沉淀法

　　方案3.1 用盐先陆湖析法选择性沉淀蛋白质

军光往原精十跳己草部　　方案3.2 用有机溶剂关沉淀蛋白质

　　方案3.3 使用蛋白质排阻和拥挤剂选择性沉淀蛋白质

　　参考文献

　　第4章 蛋白质的浓缩

　　4.1 吸附法

　　4.2 超滤法

　　4.3 沉淀法

　　4.4 透析法

　　4.训效都底丝婷甚5 冷冻干燥法

　　4.6 双水相分离法

　　方案4.1用透析袋进行脱盐、浓缩和更换缓冲液

　　方案4.2用不对称圆盘膜超滤进行浓初落包决鲁缩或透析

　　参考文献

　　第2部分 色谱法分离纯化蛋白质

　　参考文献

　　第5章 凝胶过滤色谱

　　5.1 基本原理

　　5.2 实验方案设计

　　5.2.1 凝胶介质的选择

　　5.2.2 凝胶介质的预处理

　　5.2.3 色谱柱的选择

　　5.2.4 凝胶柱的装填

　　5.2.5 样品处理和上样

　　5.2.6 洗序春短议用脱和收集

　　5.2.7 色谱柱的清洗、再生与保存

　　方案5.1 用凝胶过滤色谱更换缓冲液

　　方案5.2 凝胶过滤色谱分离三种分子量不同的蛋白质

　　参考文献

　　第6章 离子交换色谱

　　6.1 基本原理

　　6.重击斯商天宽况纪胞专2 实验方案设计

　　6.2.1 离子交换介质的选择

　　6.2.2 流动相的选他择

　　6.2.3 色控成钢玉第载谱柱的选择

　　6.2扬展言强精边画有.4 离子交换剂预处理和装柱

　　守造飞铁吧百书6.2.5 加样

　　6.2.促探灯司黑局6 洗脱

　　6.2.7 洗脱组分的收集和分析

　　6.2.8 离子交换剂的再生、清洗与储存

　　方案6.1 弱阴离子交换色谱和强阳离子交换色谱在分离纯化单克隆抗体中的应用

　　参考文献

　　第7章亲和色谱54

　　71基本原理54

　　72亲和色谱的几种类型55

　　721金属螯合亲和色谱55

　　722免疫亲和色谱56

　　723凝集素亲和色谱56

　　73实验方案设计56

　　731亲和吸附剂的选择56

　　732装柱56

　　733上样57

　　734吸附57

　　735流速和清洗57

　　736洗脱57

　　737再生和保存58

　　方案71亲和色谱纯化抗体融合蛋白58

　　方案72金属螯合亲和色谱分离大肠杆菌重组表达的蛋白61

　　方案73从大肠杆菌中提取诱导表达的GST标签融合蛋白63

　　参考文献65

　　第8章疏水色谱66

　　81基本原理66

　　82实验方案设计67

　　821疏水配基的选择67

　　822离子强度及种类67

　　823破坏水化作用的物质68

　　824温度68

　　825洗脱方式68

　　826表面活性剂68

　　827色谱柱使用后的处理69

　　方案81用疏水色谱去除抗体融合蛋白样品中的多聚体69

　　参考文献72

　　第9章分子印迹技术73

　　91分子印迹主要术语74

　　911功能单体74

　　912交联剂74

　　913溶剂和致孔剂75

　　914引发剂75

　　915适用的印迹分子76

　　92分子印迹的分类76

　　921共价型76

　　922非共价型77

　　93印迹效率的评价77

　　931保留因子77

　　932分离因子77

　　933分离度77

　　934等温吸附方程78

　　935经典孔径分布曲线78

　　936吸附曲线78

　　937其他手段78

　　94分子印迹技术在蛋白质分离中的展望78

　　方案91溶菌酶分子印迹的制备和应用80

　　方案92血红蛋白分子印迹的制备和应用83

　　参考文献86

　　第10章高效液相色谱法分离纯化蛋白质88

　　101高效液相色谱的基本原理和分类88

　　1011与经典液相(柱)色谱法比较88

　　1012高效液相色谱法的特点88

　　1013高效液相色谱仪89

　　1014高效液相色谱常用参数90

　　1015高效液相色谱仪标准操作规程92

　　102常用流动相的极性和选择94

　　1021何谓流动相94

　　1022流动相的性质要求 94

　　1023流动相的选择95

　　1024准备流动相的一般过程95

　　1025卤代有机溶剂应特别注意的问题 97

　　1026HPLC用水97

　　1027常用流动相组分的物理特性97

　　103常用检测器97

　　1031概述97

　　1032检测器的性能指标98

　　1033各类检测器99

　　104特异性蛋白专用柱特点和操作106

　　1041固定相106

　　1042色谱类型106

　　1043常用键合相的表面化学结构107

　　1044色谱柱 107

　　105常见故障排除109

　　1051与色谱柱相关的问题109

　　1052造成色谱峰(不对称)拖尾的原因110

　　1053如何解决峰形拖尾的问题110

　　1054如何贮存色谱柱111

　　1055谱图问题111

　　1056常见故障111

　　106高效液相色谱在蛋白质分离纯化中的应用实例115

　　1061反相色谱分离蛋白质115

　　方案101肽类酶解混合物色谱过程117

　　方案102蛋白质样品纯化色谱过程118

　　方案103白细胞介素2反相高效液相色谱纯化119

　　方案104水蛭素12肽的反相高效液相色谱纯化120

　　1062疏水作用色谱121

　　方案105高效疏水作用色谱分离纯化四种蛋白质纯品125

　　方案106人唾液蛋白的高效疏水色谱分离纯化126

　　方案107疏水作用色谱法同时纯化及复性基因重组人干扰素127

　　1063高效离子交换液相色谱法纯化蛋白质分子128

　　方案108高效阴离子交换液相色谱法129

　　方案109高效阳离子交换液相色谱法130

　　方案1010高效离子交换色谱法分离皖南尖吻蝮蛇毒活性组分131

　　方案1011高效离子交换色谱(HPIEC)分离经HPHIC 分离后的微粒体P450132

　　1064高效排阻液相色谱法纯化蛋白质分子133

　　方案1012高效体积排阻液相色谱基本操作程序135

　　方案1013重组人粒细胞集落刺激因子分子量测定136

　　参考文献137

　　第11章毛细管电色谱及其在蛋白质分离纯化中的应用138

　　111毛细管电色谱138

　　112毛细管电色谱技术历史回顾138

　　113毛细管电色谱基本分离模式139

　　1131开管柱电色谱139

　　1132填充柱电色谱140

　　1133整体柱电色谱140

　　1134CEC分离模式的选择141

　　1135CEC、CE和HPLC的对照分析141

　　114毛细管电色谱在蛋白分离分析中的新技术142

　　1141在线样品预浓集毛细管电色谱联用技术142

　　1142毛细管电色谱质谱联用技术在蛋白分离分析中的应用143

　　115毛细管电色谱基本术语和原理143

　　1151电迁移和电渗、电渗流、电动现象、焦耳热效应143

　　1152保留机制和分离机理143

　　116毛细管电色谱仪器144

　　1161毛细管电色谱仪器的基本要求144

　　1162基本装置145

　　1163检测系统145

　　方案111离子交换电色谱纯化蛋白质的研究146

　　方案112微流控芯片多维毛细管电色谱分离牛血清白蛋白酶消解产物150

　　方案113毛细管电色谱耦合飞行时间质谱分离鉴定卵清蛋白的酶解

　　产物153

　　参考文献154

　　第12章其他色谱分析方法简介156

　　121超临界流体色谱156

　　1211超临界流体简介156

　　1212超临界流体色谱简介156

　　1213SFC的流动相156

　　1214SFC的固定相157

　　1215SFC的检测系统157

　　1216联机分析与定性158

　　122逆流色谱158

　　1221简介158

　　1222逆流色谱的特点159

　　1223溶剂体系的选择和制备159

　　1224CPC的检测仪器160

　　123亲水色谱160

　　1231简介160

　　1232HILIC的特点160

　　1233HILIC固定相161

　　1234展望162

　　124快速色谱162

　　1241简介162

　　1242快速色谱原理与系统组成162

　　1243与制备HPLC的关系163

　　参考文献163

　　第3部分电泳法分离纯化蛋白质

　　第13章聚丙烯酰胺凝胶电泳166

　　131聚丙烯酰胺凝胶电泳常用溶液及配制166

　　132不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳167

　　133变性聚丙烯酰胺凝胶电泳167

　　134聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳169

　　135小分子多肽凝胶电泳170

　　136非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳170

　　137聚丙烯酰胺凝胶中蛋白的回收170

　　方案131SDS变性电泳分析牛血清白蛋白(BSA)171

　　方案132BSA变性梯度胶电泳方案173

　　方案133小分子多肽(抗菌肽)凝胶电泳174

　　方案134非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳175

　　参考文献177

　　第14章聚丙烯酰胺等电聚焦178

　　141聚丙烯酰胺等电聚焦具有高分辨率的特点178

　　142等电聚焦pH梯度的形成178

　　143等电聚焦电泳板式179

　　方案141HeLa细胞裂解液等电聚焦179

　　参考文献181

　　第15章双向电泳182

　　151样品的制备182

　　152IPG的选择和上样183

　　153第一向电泳:等电聚焦电泳(IEF)183

　　154IPG胶条平衡184

　　155采用垂直系统进行第二向电泳:十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶

　　电泳(SDSPAGE)184

　　方案151HeLa细胞周期依赖性蛋白表达和修饰的分析184

　　参考文献186

　　第4部分蛋白质纯化效果的评价和蛋白质分析

　　第16章蛋白质浓度、纯度及活性的分析188

　　161测定蛋白质浓度的方法简介188

　　1611凯氏定氮法188

　　1612双缩脲法188

　　1613Lowry法189

　　1614紫外分光光度法189

　　1615考马斯亮蓝染色法190

　　1616BCA检测法190

　　162测定蛋白质纯度的方法简介190

　　1621电泳法190

　　1622色谱法190

　　1623免疫化学法190

　　163测定蛋白质活性的方法简介191

　　方案161双缩脲法测定未知蛋白的含量191

　　方案162BCA法测定蛋白质浓度192

　　方案163豆类中球蛋白的定量分析193

　　方案164心肌、骨骼肌线粒体内膜ATPase的测定194

　　方案165荧光分光光度法测定肌肉中乳酸脱氢酶的活性195

　　参考文献196

　　第17章蛋白质的分析及应用197

　　171质谱技术在蛋白质分析中的应用197

　　172核磁共振法在蛋白质分析中的应用197

　　173X射线晶体学相关的蛋白质纯化198

　　方案171白眉蝮蛇蛇毒精氨酸酯酶分离提纯及分子量的质谱测定198

　　方案172肿瘤差异蛋白质的质谱定性198

　　方案173果蝇蛋白质磷酸化的质谱分析200

　　方案174核磁共振法研究细胞色素空间结构202

　　方案175以X射线衍射为目的的SARSCOV Mprc蛋白的分离纯化202

　　参考文献203