为中来自等碱性阴离子交换剂，柱层析用于吸附剂，用以分离提纯多糖、肽、核苷酸、酶、血360百科清组分和病毒等各种生物高分子。

• 中文名称 纤维素DE-52
• 外文名称 DEAE Cellulose DE-52
• 作用 提纯多糖、肽、核苷酸、酶、血清
• 保存温度 +4--30℃

提取方法

　　纤维素DE-52提取法纯化多克隆抗体

　　该法提取I导殖期基却帮联程gG简便，既可小量提取， 也可大量制备。

　　1.批量提取法 称取DEAE-纤维素(DE52)50g，置于1000ml烧杯中， 先以蒸馏水漂浮除去细颗粒，再经酸碱处理后，用0.01~0.05mol/L，pH8.0 左右的磷酸评盐缓冲液(PB)平衡住概。将水分抽干，或用布氏滤斗(内放两层滤纸)过滤，收集湿纤维素， 以降低其离子强度。按1ml血清加湿重5g DE52，经过充分搅拌，置4℃吸附1h。 上清液可再如此处理一次，即获得较纯的IgG。该法提取IgG简便，既可小量提取， 也可大量制备。

　　来自2.Tris-Cl离子交换层析法(Ion-exch线烈民底磁ange chromato举者散九只课希联群日graphy)

　　【材料和试剂】

　　(1)DE52纤维素。

　　(2)HCl;NaOH;0.01~0.05mol/L，pH8.0 PB;0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl;0.5mol/360百科L NaCl。

　　(3)待纯化标本:杂交瘤腹水或培养上清，免疫血清或饱和硫酸铵粗提品。

　　(4)1.5×环满50cm 层析柱;透析袋;紫外分光光度计及其他透析和层析所需的试剂和器材。

　　【操作步骤】

　　(1)DE52纤维素的处理:DE52经酸、碱处理，0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl平衡。

　　(2)装柱:将层析柱固定于滴定架上，柱底垫一圆形尼龙纱频鱼香多，出口接一细塑料管并关闭出水。将浸泡于0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl中的DE52沿玻璃棒宣石械挥大袁令从院自倒入柱中，待DE52自然沉降3~5cm高时，吸除0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl，或松开出化谓树密水口螺旋夹 ，控制流速1~2ml/min，同时连续加入DE52至所需高度。待DE52完全沉降后培完例久出，柱面放一圆形滤纸片。

末办永罗和定室结　　(3)平衡:松开出水口螺旋夹，以0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl平衡，控制流速为15 滴/min，待流出液与洗脱液之pH值达到一致时，停止平衡。

　　(4)待提取样品的准备:将蛋白装入透析袋里，置入心属饭4℃冰箱，对0. 0信临菜现星影守费1mol/L  pH8. 6 Tr划元is-Cl透析过夜。

　　(5)加样、洗脱合些证算编围唱升客与收集:用吸管吸去柱面液体，以毛细吸管沿柱壁加入样品，样品体积相当于柱床体积的1%~2%，蛋白浓度为50~70mg。 启开出水口螺旋夹使样品缓慢进入柱床内，并用少量洗脱液清洗柱壁;待光液体进入柱床后，以0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl洗脱，控制侵办孩明沉流速为14~16滴/m矿较他士现生含山适in。分部收集器收集，紫外监测，或人工收集，以紫外分光光度计分别测定每管280nm OD值，描绘洗脱液峰。

　　(6)浓缩:将洗脱液的280nm OD上峰段与下峰段各管分别合并，装入透析袋，以 PEG浓缩至所需体积。

　　Tris-PO4离子交换层析法

　　该法在上述方法的基础上稍加改良，即通过梯度洗脱，可用于血清中IgG和IgM的提取。

　　【材料和试剂】

　　(1)DE52纤维素。

　　(2)待纯化标本:杂交瘤腹水或培养上清，免疫血清或饱和硫酸铵粗提品。

　　(3)1.5×50cm 层析柱;透析袋及其他透析和层析所需的试剂和器材。

　　(4)梯度洗脱液包括:0.005 mol/L，pH8.6 Tris-PO4;0.055mol/L，pH6.0 Tris-PO4;.5mol/L，pH5.1 Tris-PO4。

　　【操作步骤】

　　(1)蛋白标本对0.005mol/L，pH8.6 Tris-PO4透析。

　　(2)DE52装柱，并以0.005mol/L，pH8.6 Tris-PO4平衡。

　　(3)加样，以0.005mol/L，pH8.6 Tris-PO4洗脱，紫外监测直至洗脱液280nm OD回到基线。这一步骤可除去血清中其他蛋白。

　　(4)以 350ml  0.055mol/L，pH6.0 Tris-PO4洗脱，这一步骤可用于纯化血清IgG和IgM。

　　(5)以 125ml  0.055mol/L，pH6.0 Tris-PO4和125ml 0.5mol/L，pH5.1 Tris-PO4梯度洗脱 ， 总量收集250ml;重复步骤(5)。

　　(6)根据280nm峰值合并蛋白峰，透析浓缩和保存同上。

　　用过的DE52可用0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl和0.5mol/L NaCl、0.01mol/L，pH8. 6 Tris-Cl梯度洗脱回收。再用蒸馏水洗至中性，加入0.02%叠氮钠于4℃保存备用。

性质用途

　　性状:干燥细结晶或纤维状

　　基质 高度交联纤维素

　　配基 二乙基氨基乙基

　　配基密度 40μmol /ml

　　吸附载量 180mg HSA/ml

　　填料的颗粒大小 50μm

　　最大流速 300cm/h

　　pH范围 3-10，在位清洗时pH范围可到2-11

　　化学稳定性 各种缓冲液及盐，0.5M NaOH及醋酸，8M脲，6M盐酸胍，乙醇，异丙醇等

　　物理稳定性 0.1M中性缓冲液中，120℃30min